Collagenase I | I型胶原酶

应用

来自溶组织梭菌的胶原酶在生物学研究中具有广泛的用途，它可用于制备分离的细胞悬浮液。该产品适用于人类肿瘤、小鼠肾脏、人类成人和胎儿脑、肺和许多其他上皮组织的解聚。它还被证明可有效用于肝脏和肾脏灌注研究、胰腺消化、非实质大鼠肝细胞的分离以及肝细胞的制备。 胶原酶已用于研究晚期糖基化终产物所需的动脉组织的制备。该酶已经测试可以约1 mg/mL的浓度释放肝细胞。用于消化的浓度范围是0.1至5 mg/mL。

生物化学/生理学行为

该胶原酶产物是由溶组织梭菌所分泌的酶混合物组成，且不同的产物可通过在分泌酶中所发现的10-18种化合物的比例而进行区分。 主要的成分是两种胶原酶、梭菌蛋白酶和一种中性蛋白酶。 这些酶的协同作用可降解胶原蛋白及其他细胞内物质。胶原酶和中性蛋白酶的作用对于从组织中有效释放细胞是必需的。 不同类型的胶原蛋白是胶原酶的天然底物。 每摩尔胶原蛋白酶被4g原子钙活化。 它被乙二醇-双（β-氨基乙基醚）-N，NN′,N′-四乙酸，β-巯基乙醇、谷胱甘肽、巯基乙酸和8-羟基喹啉抑制。

制备注意事项

该产品相当于最初的40％硫酸铵部分 Mandl, I., et al.,J. Clin.Invest., 32, 1323 (1953).溶液通常是在TESCA缓冲液（含有50mM TES、0.36mM氯化钙，37℃时pH 7.4）中按1-2 mg/mL进行制备。

单位定义

一个胶原蛋白消化单元（CDU）从牛跟腱胶原蛋白中释放的肽链量和1.0 μ亮氨酸，5小时，pH7.4,37℃，在钙离子存在下的茚三酮颜色相同。一个 FALGPA水解单元每分钟，25℃，水解1.0 μmole 呋喃基丙烯酰-Leu-Gly-Pro-Ala。一个中性蛋白酶单元水解酪蛋白，产生颜色和1.0 μmole 酪氨酸每5小时，pH7.5,37℃下产生的相同。一个梭菌蛋白酶单元在DTT存在下，pH7.6,25℃，每分钟水解1.0 μmole BAEE。

警告

根据所提供的信息，该产品在-20°C下可稳定保存一年。 在37℃、50℃和-20℃下FALGPA或蛋白酶的活性在30天内不会有损失。如果进行分装（10mg / mL）并快速冻存在-20℃，则粗胶原酶的溶液是可以稳定的。进一步的反复冻融会损坏溶液。 该产品在置于冰上时可保持100%活性超过7小时。

一般说明

胶原酶是一种可切割被称为胶原蛋白的三螺旋蛋白的蛋白酶。存在有三种类型的组织胶原酶，而它们都属于基质金属蛋白酶（MMP）家族。从溶组织梭菌中获得的胶原酶具有非常强的活性，因为它可在低至4-10℃的温度下从两端对胶原蛋白进行消化。粗胶原酶混合物含有两种主要的酶类型，即胶原酶和梭菌蛋白酶。