Trypsin | 胰蛋白酶

组分

胰蛋白酶由223个氨基酸残基的单链多肽组成，通过从胰蛋白酶原中去除N-末端六肽而产生，胰蛋白酶原在Lys-lle肽键处被裂解。氨基酸序列通过6个二硫键交联。这是胰蛋白酶，β-胰蛋白酶的天然形式。BETA-胰蛋白酶可以自溶，在 Lys-Ser残基上裂解，产生α-胰蛋白酶。胰蛋白酶是丝氨酸蛋白酶家族的成员。

应用

对于胰蛋白酶消化肽，胰蛋白酶：肽 使用约为 1：100 至 1:20 的比例。从培养表面除去粘附细胞是本产品的一个典型应用。 从其底物中去除细胞所需的胰蛋白酶浓度主要取决于细胞类型和培养物的年龄。 胰蛋白酶也被用于细胞培养期间细胞的再悬浮、蛋白质组学研究中的蛋白质消化和各种凝胶内消化。 其他应用包括：通过基于膜的技术评估结晶，用在确定动力学陷阱的存在会限制蛋白质的折叠速率和产量的一项研究中。

生物化学/生理学行为

胰蛋白酶在赖氨酸和精氨酸残基的C末端切割肽。 如果酸性残基位于切割位点的任一侧，则该反应的水解速率减慢，如果脯氨酸残基位于切割位点的羧基侧，则水解停止。 胰蛋白酶活性的最佳pH为7-9。 胰蛋白酶还可以起到裂解氨基酸合成衍生物的酯和酰胺键的作用。 EDTA被添加到胰蛋白酶溶液中作为螯合剂，该螯合剂中和钙离子和镁离子，这些离子模糊了胰蛋白酶作用的肽键。 去除这些离子会增加酶活性。 丝氨酸蛋白酶抑制剂，包括DFP，TLCK，APMSF，AEBSEF和抑肽酶等，都会抑制胰蛋白酶。

单位定义

一个BAEE酶活单位：使用BAEE作为底物，将在25℃， pH 7.6的条件下，A253吸光值每分钟产生0.001的变化。 一个BTEE单位= 320个ATEE单位

制备注意事项

溶解胰蛋白酶应使用不含Ca2 +或Mg2 +的缓冲盐溶液。 它可溶于1 mM HCl，浓度为1 mg / mL。 它也经过TPCK处理和透析。 用L-1-甲苯磺酰胺-2-苯乙基氯甲基酮（TPCK）处理降低了胰蛋白酶通常存在的胰凝乳蛋白酶活性。

警告

1mM HCl中的溶液以小份储存在-20℃可以稳定1年。 Ca2 +的存在也会降低胰蛋白酶的自溶性并维持其在溶液中的稳定性。 胰蛋白酶还将在2.0M尿素， 2.0M盐酸胍或0.1％（w / v）SDS中保留其大部分活性。